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通用型全基因組擴增試劑盒模板變性觀察

更新日期╃▩: 2022-12-10
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通用型全基因組擴增試劑盒(WGA)是用於基因組DNA擴增全基因組的試劑盒₪↟··↟,可以方便✘↟│✘、簡單✘↟│✘、快速✘↟│✘、經濟的得到穩定產量的基因組DNA擴增樣品◕₪。產物可用於多種後續試驗₪↟··↟,包括多重PCR✘↟│✘、長片斷PCR✘↟│✘、定量PCR✘↟│✘、克隆✘↟│✘、 文庫構建✘↟│✘、單倍型分析✘↟│✘、測序✘↟│✘、基因晶片分析✘↟│✘、各種遺傳分析(片段差異₪↟··↟, 微衛星差異₪↟··↟,SNP₪↟··↟,STR)等◕₪。操作簡便快捷₪↟··↟,恆溫(30℃)反應₪↟··↟,無須PCR儀即可實現擴增◕₪。本產品只能用於科研◕₪。
模板變性╃▩:
1. 在PCR塑膠管中加入9μL WGA溶液A₪↟··↟,加入1μL純化好的基因組DNA模板 (DNA含量在10ng-100ng之間)◕₪。
2. 在PCR儀器上95℃3分鐘變性模板DNA◕₪。注意╃▩:必須開啟熱蓋◕₪。
3. 冰上放置待用◕₪。
4. 加入10μL 2×WGA溶液B₪↟··↟,輕柔吹打混勻◕₪。
5. 加入1μL phi 29 DNA聚合酶(10U/μL)₪↟··↟,輕柔吹打混合均勻◕₪。
6. 30℃保溫10-12小時◕₪。使用PCR儀進行30℃保溫並開啟熱蓋保溫◕₪。如果採用30℃水浴₪↟··↟,在樣品管中加入30-50μL石蠟油以防水分蒸發₪↟··↟,因為30℃長時間的水浴也能使水分蒸發到管壁₪↟··↟,從而改變反應體系中各成分的濃度✘↟│✘、降低WGA反應效率◕₪。如果模板DNA量比較高₪↟··↟,WGA三小時即可檢測到DNA擴增◕₪。
7. 65℃保溫20分鐘使phi29 DNA聚合酶滅活₪↟··↟,然後-20℃長期放置或立即使用◕₪。注╃▩:由於phi29 DNA聚合酶有DNA外切活性₪↟··↟,所以強烈推薦反應結束後65℃保溫20分鐘以將酶滅活以免其干擾後續反應或長期儲存時其降解DNA◕₪。
 
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