操作步驟││··：1.從室溫平衡20min後的鋁箔袋中取出所需板條╃◕◕▩▩，剩餘板條用自封袋密封放回4℃；
2.設定標準品孔和樣本孔╃◕◕▩▩，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；
3.樣本孔先加待測樣本10μL╃◕◕▩▩，再加樣本稀釋液40μL；空白孔不加；
4.除空白孔外╃◕◕▩▩，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL╃◕◕▩▩，用封板膜封住反應孔╃◕◕▩▩，37℃水浴鍋或恆溫箱溫育60min；
5.棄去液體╃◕◕▩▩，吸水紙上拍幹╃◕◕▩▩，每孔加滿洗滌液╃◕◕▩▩，靜置1min╃◕◕▩▩，甩去洗滌液╃◕◕▩▩，吸水紙上拍幹╃◕◕▩▩，如此重複洗板5次（也可用洗板機洗板）；
6.每孔加入底物A₪✘₪✘◕、B各50μL╃◕◕▩▩，37℃避光孵育15min；
7.每孔加入終止液50μL╃◕◕▩▩，15min內╃◕◕▩▩，在450nm波長處測定各孔的OD值▩◕◕◕•。
操作注意事項││··：
1.試劑盒儲存在2-8℃╃◕◕▩▩，使用前室溫平衡20分鐘▩◕◕◕•。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶╃◕◕▩▩，這屬於正常現象╃◕◕▩▩，水浴加熱使結晶溶解後再使用▩◕◕◕•。
2.實驗中不用的板條應立即放回自封袋中╃◕◕▩▩，密封（低溫乾燥）儲存▩◕◕◕•。
3.濃度為0的S0號標準品即可視為陰性對照或者空白；按照說明書操作時樣本已經稀釋5倍╃◕◕▩▩，終結果乘以5才是樣本實際濃度▩◕◕◕•。
4.嚴格按照說明書中標明的時間₪✘₪✘◕、加液量及順序進行溫育操作▩◕◕◕•。
5.所有液體組分使用前充分搖勻▩◕◕◕•。
