禽流感病毒RT-PCR核酸檢測試劑盒

產品介紹

禽流感病毒RT-PCR核酸檢測試劑盒說明書

【試劑盒簡介】

禽流感病毒RT-PCR 檢測試劑盒◕╃╃，採用反轉錄聚合酶鏈反應（RT-PCR ）技術檢測禽組織│₪··▩、分泌物和排洩物中所有亞型的AIV◕╃╃，適用於AIV的檢測│₪··▩、診斷和流行病學調查╃₪✘₪。

【原理】

利用吸附柱提取RNA作為模板◕╃╃，在反轉錄酶的作用下◕╃╃，以引物為起點合成與RNA 模板互補的cDNA鏈；然後在DNA 聚合酶的作用下◕╃╃，經高溫變性│₪··▩、低溫退火和中溫延伸的多次迴圈◕╃╃，使特異DNA 片段的複製數放大數百萬倍╃₪✘₪。將擴增的DNA 片段進行電泳│₪··▩、染色後◕╃╃，在紫外燈下◕╃╃，肉眼可見DNA 片段的擴增帶╃₪✘₪。 

【試劑盒組份】

注▩✘：塑膠袋內試劑（陽性對照│₪··▩、RT-PCR反應液A和B）-20 ℃凍存◕╃╃，裂解液2-8℃冷藏◕╃╃，其他室溫儲存╃₪✘₪。

【操作方法】

一│₪··▩、樣品製備

1樣品採集▩✘：▩✘：病死或撲殺的禽◕╃╃，取肺│₪··▩、脾│₪··▩、腦等組織；待檢活禽◕╃╃，用棉拭子取呼吸道分泌物◕╃╃，放於50%甘油生理鹽水中或用注射器取血5 mL◕╃╃，2～8 ℃儲存╃₪✘₪。（要求送檢病料新鮮◕╃╃，嚴禁反覆凍融╃₪✘₪。）

2.1 組織樣品的處理▩✘：稱取組織0.1g於研磨器中磨碎◕╃╃，再加1mL生理鹽水繼續磨至無塊狀物；然後將樣品轉至1.5 mL滅菌離心管中◕╃╃，8000 rpm離心2 min◕╃╃，取100 µL上清於1.5 mL 滅菌離心管中╃₪✘₪。2樣品處理▩✘：

2.2 全血樣品的處理▩✘：待血凝後取100 µL血清於1.5 mL 滅菌離心管中╃₪✘₪。

2.3 陽性對照的處理▩✘：取陽性對照 100 µL於1.5 mL 滅菌離心管中╃₪✘₪。

2.4 陰性對照的處理▩✘：取陰性對照100 µL於1.5 mL 滅菌離心管中╃₪✘₪。

二│₪··▩、病毒RNA的提取

1. 取已處理的樣品│₪··▩、陰性對照和陽性對照◕╃╃，分別加入450µL裂解液◕╃╃，充分顛倒混勻◕╃╃，室溫靜置3min ╃₪✘₪。

2. 加入275µL無水乙醇◕╃╃，輕輕混勻╃₪✘₪。

3. 將混合液吸入吸附柱中（吸取液體時儘量不要吸到懸浮雜質◕╃╃，以免離心時堵塞吸附柱）◕╃╃，10,000 rpm 離心1min◕╃╃，棄去收集管中液體◕╃╃，套回收集管╃₪✘₪。

4. 向吸附柱中加入500µL洗滌液A◕╃╃，10,000 rpm 離心1min◕╃╃，棄去收集管中液體◕╃╃，套回收集管╃₪✘₪。

5. 向吸附柱中加入500µL洗滌液B◕╃╃，10,000 rpm 離心1min◕╃╃，棄去收集管中液體◕╃╃，套回收集管╃₪✘₪。

6. 空柱10,000 rpm 離心2 min╃₪✘₪。

7. 將吸附柱移入新的無RNA酶的1.5 mL離心管中◕╃╃，在膜中央加入30µL洗脫液◕╃╃，室溫靜置2min◕╃╃，10,000 rpm 離心1min◕╃╃，獲得總RNA╃₪✘₪。

三│₪··▩、RT-PCR

1. 反應體系▩✘：分別取14µL RT-PCR反應液A（用前混勻）│₪··▩、4µL RT-PCR反應液B（用前混勻）和2µL模板RNA◕╃╃，混勻╃₪✘₪。

2. 反應程式▩✘：在PCR儀上執行以下程式▩✘：42 ℃ 45 min◕╃╃，94 ℃ 3 min ；94 ℃ 30 s │₪··▩、53℃ 30 s │₪··▩、72 ℃ 30 s◕╃╃，35個迴圈；72 ℃延伸10 min╃₪✘₪。

四│₪··▩、電泳

1. 制膠▩✘：用50倍稀釋的TAE電泳緩衝液配製1%瓊脂糖凝膠╃₪✘₪。

2. 電泳▩✘：待膠凝固後◕╃╃，取5µL PCR擴增產物點樣於瓊脂糖凝膠孔中◕╃╃，以5V/cm的電壓於50 倍稀釋的TAE 電泳緩衝液中電泳╃₪✘₪。

3. 染色▩✘：取50 倍稀釋的TAE 電泳緩衝液30mL◕╃╃，加入10µL染色液◕╃╃，混勻後將膠浸泡30min◕╃╃，於紫外燈下觀察結果╃₪✘₪。

【結果判斷】

      陽性對照出現400bp擴增帶◕╃╃，陰性對照無帶出現（引物帶除外）時◕╃╃，實驗結果成立╃₪✘₪。被檢樣品出現400bp擴增帶為新城疫病毒陽性◕╃╃，否則為陰性╃₪✘₪。

【需用但未提供的材料】

      組織研磨器│₪··▩、眼科剪│₪··▩、眼科鑷│₪··▩、一次性注射器│₪··▩、瓊脂糖│₪··▩、經焦碳酸二乙酯（DEPC ）處理的滅菌1.5mL 離心管和吸頭（10 µL│₪··▩、200 µL│₪··▩、1000 µL）╃₪✘₪。

【注意事項】

1．本試劑盒有效期為6個月◕╃╃，不要使用超過有效期限的試劑◕╃╃，試劑盒之間的組分不要混用╃₪✘₪。

2．所有試劑應在規定的溫度儲存◕╃╃，使用時拿到室溫下◕╃╃，使用後立即放回╃₪✘₪。

3．注意防止試劑盒組分受汙染╃₪✘₪。使用前將塑膠袋內試劑瞬離15s◕╃╃，使液體全部沉於管底◕╃╃，放於冰盒中◕╃╃，吸取液體時移液器吸頭儘量在液體表面層吸取╃₪✘₪。

4．嚴格按試劑盒說明書操作可以獲得的結果╃₪✘₪。操作過程中移液│₪··▩、定時等全部過程必須精確╃₪✘₪。

5．RNA提取過程中◕╃╃，應戴口罩│₪··▩、勤換手套◕╃╃，儘量縮短操作時間╃₪✘₪。

6．所有接觸病料的物品均應合理處理◕╃╃，以免汙染實驗室╃₪✘₪。

公司優勢▩✘：
1）質量▩✘：我司提供的的試劑均經過出廠檢測╃₪✘₪。不對可退換
2）價格▩✘：價格實惠◕╃╃，量大從優◕╃╃，產品價格隨時會變動◕╃╃，實時報價還請來電獲取╃₪✘₪。
4）服務▩✘：提供完整的售前│₪··▩、售後和售中服務╃₪✘₪。售後到底

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